CfDNA (ang. cell free DNA), czyli wolne pozakomórkowe DNA to niewielkie fragmenty DNA krążące w krwi każdego człowieka.

We krwi kobiety ciężarnej znajduje się mieszanina jej własnego wolnego pozakomórkowego DNA (cfDNA) i wolnego pozakomórkowego DNA płodu (cffDNA, ang. cell free fetal DNA). Ilość całkowitego cfDNA we krwi matki, czy też ilość poszczególnych jego frakcji – matczynej i płodowej, nie zależy od płci płodu. Płeć dziecka ma natomiast wpływ na część sekwencji frakcji płodowej, czyli cffDNA (wolne pozakomórkowe DNA płodu).

Ponieważ cffDNA to materiał genetyczny pochodzący głównie z komórek łożyska, a komórki te wywodzą się z zygoty (zapłodnionej komórki jajowej), to reprezentuje on DNA dziecka. A więc w cffDNA możemy znaleźć fragmenty DNA pochodzące z poszczególnych chromosomów płodu, w tym chromosomów płciowych. Jeżeli płód ma płeć męską, we frakcji płodowej wolnego pozakomórkowego DNA (cffDNA) wyizolowanego z krwi matki będą sekwencje charakterystyczne dla chromosomu Y. Natomiast gdy płód ma płeć żeńską, sekwencje charakterystyczne dla chromosomu Y nie będą obecne w cffDNA.